摘要：目的研究银翘散及其拆方（君药、臣药、佐药、使药）对流感病*感染自然杀伤细胞活性及转录组的影响。方法以小鼠流感病*PR8（A/PuertoRico/8/，H1N1型）感染ICR小鼠制备肺炎模型，分为对照组、模型组和给药组，每组10只；银翘散、君药（金银花、连翘）、臣药（薄荷、牛蒡子、淡豆豉、荆芥穗）、佐药（桔梗、芦苇根、淡竹叶）和使药（甘草）、阳性药物利巴韦林分别ig模型小鼠5d；第5天检测小鼠体质量、肺质量，计算肺质量抑制率；固定肺脏，观察病理学变化（HE染色）。以PR8病*感染C57BL/6J小鼠制备肺炎模型，分为对照组、模型组和给药组，每组3只，上述药物分别ig5d，第5天摘取肺脏，制备白细胞悬液，采用流式细胞术检测自然杀伤（naturekiller，NK）细胞表面激活性受体Ly-49D和Ly-49H的含量，以及细胞*性受体NKp46的含量。为了进一步探究药物与病*感染NK细胞之间的互作关系，建立人流感病*HK8（A/HongKong/8/68，H3N2型）感染人自然杀伤细胞系NK-92MI模型，比较银翘散及臣药对病*感染NK细胞转录组作用的异同。结果银翘散及其拆方对PR8病*感染引起的小鼠肺炎均有一定的抑制作用，抑制作用由强到弱为臣药＞银翘散＞使药＞君药＞佐药，其中臣药和银翘散组具有统计学差异（P＜0.05）。银翘散及其拆方均能增加肺脏NK细胞激活性受体Ly-49D和Ly-49H的含量，其促进作用由强到弱为臣药＞使药＞银翘散＞君药＞佐药，其中银翘散、君药、臣药和使药组均具有统计学差异（P＜0.05、0.01）。结合上述2个指标，臣药表现出与银翘散相似的药效特征，且略优于银翘散。对于PR8病*感染小鼠肺脏NK细胞*性受体NKp46的含量，臣药也表现出良好的诱导表达作用。HE染色显示，经臣药治疗的PR8病*感染小鼠，其肺脏结构完好，肺泡和支气管腔内未出现炎症细胞和红细胞浸润。NK细胞转录组分析显示，臣药对于HK8病*感染的NK细胞的作用位点，不仅囊括了银翘散的作用位点，而且比银翘散更为广泛。结论对于流感病*感染小鼠，银翘散的拆方臣药表现出与银翘散全方相似的药效，且略优于银翘散，这可能与臣药对NK细胞活性的调节作用比银翘散更广泛有关。
银翘散出自清代吴塘所著的《温病条辨》，为辛凉解表的代表方剂，其主要功用为辛凉透表、清热解*，是临床上治疗流行性感冒的常用中医药方剂。银翘散原方由连翘（30g）、金银花（30g）、桔梗（18g）、薄荷（18g）、淡竹叶（12g）、荆芥穗（12g）、淡豆豉（15g）、牛蒡子（18g）、生甘草（15g）为散，以鲜芦苇根煎汤服用。现代药理学研究证明，银翘散能够降低流感病*感染小鼠死亡率及肺部病*载量、延长小鼠生存周期[1-2]。在胸腺缺陷小鼠[T细胞缺陷，自然杀伤（naturalkiller，NK）细胞正常]模型中，NK细胞活性在流感病*感染后第1天显著升高，第3、5、7天明显降低；银翘散各剂量组NK细胞活性在流感病*感染后第3、5、7天较模型组有明显提高[3]。本课题前期研究表明，在SCID小鼠（T和B淋巴细胞缺陷，NK细胞活性较正常小鼠高）模型中，NK细胞活性在流感病*感染第3天开始降低；经银翘散治疗后，NK细胞活性有所提高，并且各剂量组间体现出一定的量效关系[4]，同时银翘散还能够增强抗病*免疫应答相关细胞及因子水平[5-6]。
对于不同的免疫状态，流感病*均能使NK细胞活性呈现降低趋势，而银翘散能够翻转这种免疫状态，增强NK细胞的免疫功能。为此，本实验进一步将流感病*感染的NK细胞作为研究模型，通过君、臣、佐、使的拆方研究，明确银翘散发挥抗病*及免疫增强作用的主要药物，为银翘散在临床中的精简应用提供实验依据，为中药抗流感病*方剂的现代化研究提供研究思路。
1材料
1.1药品与试剂
金银花（批号W）、连翘（批号W）、薄荷（批号S）、牛蒡子（批号W）、淡豆豉（批号W）、荆芥穗（批号S）、桔梗（批号S）、芦苇根（批号W）、淡竹叶（批号S）和生甘草（批号S），均为配方颗粒，购自华润三九医药股份有限公司。本实验中使用的药物剂量均参照方剂中的临床剂量，将生药剂量折算为颗粒剂的用量，并将临床剂量按照体表面积等效剂量转换法，换算为小鼠剂量，并按照临床配伍比例配伍使用。故本研究中各药物的小鼠剂量为金银花0.44g/kg、连翘0.22g/kg、薄荷0.22g/kg、牛蒡子0.g/kg、淡豆豉0.11g/kg、荆芥穗0.g/kg、桔梗0.g/kg、芦苇根0.11g/kg、淡竹叶0.g/kg、生甘草0.g/kg。各拆方组中药味的剂量与其在全方中的剂量相同。银翘散和各拆方分别按照方剂配伍比例将各药物配方颗粒混合后，均以高纯水溶解，用于小鼠ig给药。将银翘散和臣药中使用的配方颗粒分别按照方剂配伍比例混合后，溶于高纯水，0.22μm微孔滤膜滤过后作为细胞实验用储备液。利巴韦林颗粒（批号），购自四川百利药业有限责任公司。FITC-Ly-49D、PE-Ly-49H、FITC-CD3e、PE-CD49b和AlexaFluor-NKp46抗体，均购自BDPharmingen公司。红细胞裂解液和4%多聚甲醛溶液，购自北京索莱宝生物科技有限公司。
1.2实验动物
4周龄SPF级ICR和C57BL/6J小鼠，雌性，体质量13～15g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，实验动物许可证号SCXK（京）-。动物实验按照*医院动物伦理委员会相关规定进行，动物实验伦理批准号为IACUC-0219。小鼠饲养于生物安全实验室（ABSL-2）动物室，室内温度26℃，湿度（60±5）%，且12h明暗交替，正常饮食、饮水。小鼠给药体积为0.2mL/10g。
1.3病*
小鼠流感病*A/PuertoRico/8/（PR8，H1N1型），由中国中医科学院中药研究所生物安全实验室提供，经鸡胚传代使用。将鸡胚中获得的病*原液用生理盐水稀释倍，作为工作液，用于小鼠感染实验。
人流感病*A/HongKong/8/68（HK8，H3N2型）购自美国ATCC（VR-?），经犬上皮细胞MDCK传代后保存为病*原液。
1.4细胞株
人自然杀伤细胞NK-92MI，购自美国ATCC（CRL-TM）。细胞以α-MEM（无核糖核苷和脱氧核糖核苷）培养基培养，培养基中添加0.2mmol/L肌醇、0.1mmol/Lβ-巯基乙醇和0.02mmol/L叶酸，含12.5%马血清和12.5%胎牛血清。细胞置于37℃二氧化碳孵箱中培养。银翘散和臣药对该细胞的剂量分别为银翘散50μg/mL，臣药μg/mL。剂量经细胞活性实验（CCK-8法）检测获得，为药物在NK-92MI细胞中的最高无*剂量。
1.5仪器
FACSCalibur流式细胞仪，美国Beckman-Coulter公司。EG包埋机，德国Leica公司；H93/RM切片机，德国Leica公司；ECLIPSELVPOL/50IPOL光学显微镜，日本尼康公司。
2方法
2.1实验分组、小鼠肺炎模型的制备及给药
将ICR和C57BL/6J小鼠分别随机分为对照组、模型（PR8病*感染）组、银翘散组（3.09g/kg）、君药（金银花、连翘）组（1.00g/kg）、臣药（薄荷、牛蒡子、淡豆豉、荆芥穗）组（0.83g/kg）、佐药（桔梗、芦苇根、淡竹叶）组（0.70g/kg）和使药（生甘草）组（0.56g/kg）、阳性药物（利巴韦林）组（82.5mg/kg）。ICR小鼠每组10只，C57BL/6J小鼠每组3只。将小鼠乙醚浅麻醉后，用PR8病*工作液滴鼻感染小鼠，30μL/只，对照组小鼠滴鼻感染等体积的生理盐水。PR8病*感染后1h按照组别分别ig给药。
2.2小鼠肺质量抑制率的检测
各组ICR小鼠给药后第5天，称体质量，ip氯胺酮（mg/kg）麻醉后45min，脱颈椎处死，摘取肺脏并称质量。计算肺指数（肺质量/体质量）和肺质量抑制率。
肺质量抑制率＝(对照组小鼠肺质量－各药物组小鼠肺质量)/(对照组小鼠肺质量－模型组小鼠肺质量)
2.3肺脏病理检测（HE染色）
将各组ICR小鼠肺脏固定于4%多聚甲醛溶液中24h。组织浸于液体石蜡，然后进行包埋、切片和贴片。切片置于60℃环境中烘烤1h，经脱蜡处理后，依次进行苏木素染色和伊红染色。切片于光学显微镜下观察并拍照。
2.4肺脏NK细胞Ly-49D和Ly-49H受体含量的检测
各组C57BL/6J小鼠给药后第5天，ip氯胺酮（mg/kg）麻醉后45min，脱颈椎处死，摘取肺脏，制备单细胞悬液，裂解红细胞后，每只小鼠取1×个细胞，以FITC-Ly-49D抗体（1.5μL/μL体系）和PE-Ly-49H抗体（2.5μL/μL体系）4℃共同孵育30min，×g离心10min。取沉淀，用2mLPBS洗一遍，×g离心10min。将细胞沉淀用μL2%多聚甲醛固定。采用流式细胞仪检测NK细胞表面激活性受体Ly-49D、Ly-49H的含量。同时设置Ly-49D、Ly-49H抗体的同型对照组。
2.5肺脏NK细胞NKp46受体的检测
各组C57BL/6J小鼠给药后第5天，ip氯胺酮（mg/kg）麻醉后45min，脱颈椎处死，摘取肺脏，制备单细胞悬液，裂解红细胞后，每只小鼠取1×个细胞，以FITC-CD3e（1.5μL/μL体系）、PE-CD49b（2.0μL/μL体系）和AlexaFluor-NKp46（2.0μL/μL体系）抗体4℃共同孵育30min，×g离心10min。取沉淀，用2mLPBS洗一遍，×g离心10min。将细胞沉淀用μL2%多聚甲醛固定。采用流式细胞仪检测NK细胞*性受体NKp46的含量。同时设置NKp46抗体的同型对照组。
2.6H3N2流感病*感染NK-92MI细胞模型的制备及药物干预
将NK-92MI细胞接种于6孔板。实验设对照组、模型（H3N2感染）组、银翘散组和臣药组，每组3个复孔。将H3N2病*原液以无血清培养基稀释82.5倍，作为病*工作液。以病*工作液培养NK-92MI细胞6h，1.5mL/孔；对照组以等体积不含病*的培养基培养。补加完全培养基1.5mL/孔，继续培养16h。银翘散组和臣药组分别加入银翘散和臣药储备液，使质量浓度分别为50、μg/mL；对照组加入等体积的高纯水。药物作用10h。
2.7NK-92MI细胞转录组分析
收集“2.6”项中的细胞，提取细胞总RNA，分离并纯化mRNA，构建cDNA文库，然后采用Illumina测序平台（IlluminaHiSeqTM2）对文库进行测序（上海欧易生物医学科技有限公司）。对差异基因进行基因本体论（geneontology，GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyotoencyclopediaofgenesandgenomes，KEGG）富集分析。
2.8统计方法
数据以表示，采用SPSS13.0软件中单因素方差分析，P＜0.05表示差异具有统计学意义。
3结果
3.1对流感病*感染小鼠肺炎的抑制作用
流感病*PR8的感染使得小鼠体质量下降、肺脏质量增加，进而肺脏指数显著高于正常小鼠（P＜0.01）。与模型组相比，阳性药物利巴韦林、银翘散、君药（金银花、连翘）、臣药（薄荷、牛蒡子、淡豆豉、荆芥穗）、佐药（桔梗、芦苇根、淡竹叶）和使药（甘草）均能够降低由流感病*引起的肺指数增加；其中利巴韦林、银翘散和臣药能够显著抑制肺指数的增加（P＜0.05、0.01）；且臣药组对肺炎的抑制作用略优于银翘散组。结果见表1。
通过以上结果发现，利巴韦林和银翘散臣药的药效优于银翘散全方，故针对对照组、模型组、利巴韦林组和臣药组小鼠的肺脏进行了病理分析。肺脏病理检测（HE染色）显示，对照组小鼠肺脏可见清晰肺泡；肺泡、支气管内无任何细胞浸润，支气管壁绒毛排列整齐。模型组小鼠（PR8流感病*感染）肺泡腔缩小，甚至塌陷，支气管中可见白细胞聚集，支气管壁绒毛细胞排列杂乱。经利巴韦林和臣药治疗的小鼠肺脏仍可见大量完好的肺泡，支气管壁绒毛排列整齐，白细胞浸润减少；利巴韦林组肺泡内仍可见因红细胞从血管漏出引起的水肿。见图1。
3.2对流感病*感染小鼠肺脏NK细胞激活性受体Ly-49D、Ly-49H含量的影响
与正常C57BL/6J小鼠相比，PR8流感病*感染小鼠后使NK细胞激活性受体Ly-49D、Ly-49H在肺脏的含量显著降低（P＜0.01）。经利巴韦林、银翘散、君药、臣药、佐药和使药治疗后，各组小鼠肺脏2种受体含量均明显增加，除佐药组外，与模型组相比，其余各组差异显著（P＜0.05、0.01），见表2。结果显示，各药物诱导2种受体表达的作用由强到弱依次为臣药＞使药＞银翘散＞君药＞佐药。各组小鼠肺脏NK细胞激活性受体Ly-49D和Ly-49H流式图见图2。
3.3对流感病*感染小鼠肺脏NK细胞*性受体NKp46含量的影响
实验中首先分选出CD3e阴性（CD3e?）细胞，即排除T淋巴细胞。在CD3e?细胞群中，CD49b阳性（CD49b+）的细胞即为NK细胞。NKp46是NK细胞表面的1个激活性受体，主要介导细胞*性反应。正常C57BL/6J小鼠肺脏表达一定量的NKp46受体。当PR8流感病*感染C57BL/6J小鼠后，小鼠肺脏NK细胞表面NKp46受体的含量出现减少的现象。通过小鼠肺脏NK细胞激活性受体L49D/H的检测对各药物活性进行初筛，发现臣药的药效最好，因此选择臣药和银翘散进一步进行小鼠肺脏NK细胞*性受体NKp46含量的检测。经银翘散和臣药治疗的PR8病*感染小鼠，NKp46受体含量均高于模型组，且臣药组效果优于银翘散组。抗病*阳性药物利巴韦林不能改善因病*感染引起的肺脏NK细胞NKp46受体含量减少的现象（图3）。
3.4对流感病*感染自然杀伤细胞转录组的影响
3.4.1主成分分析和聚类分析主成分分析能有效展示基因表达差异对样本的影响；基因表达相似的样本距离近，说明样本相似。聚类分析通过计算样本之间的距离，考察样本之间的相似性。如图4所示，对照组、模型组、臣药组和银翘散组，同一组别的样本距离相近，不同组之间在距离上能够区分开来；不同处理方法引起NK-92MI细胞mRNA表达不同。
3.4.2差异基因GO富集分析在得到差异基因后，从分子和细胞水平，根据基因的功能，将功能相似的基因富集为一类。目前GO分析有3个亚类，包括生物过程（如信号转导）、分子功能（如酶活性）和细胞成分（如核糖体）。每个亚类根据功能不同划分出不同条目。在GO富集分析中，在差异最显著的前30条上调基因条目中，银翘散组和臣药组有16个条目相同；相同条目中，臣药组上调基因不仅涵盖了银翘散组中表达上调的基因，而且上调基因种类比银翘散组更广泛。具体条目和基因名称见表3和图5。在相同上调基因中，DDIT3、JUN、FOS、EGR1、EGR2、ATF、AREG、TNFAIP3、PPP1R15A、ZFP36L个基因出现频次较高，这些基因主要参与细胞生长和凋亡过程。不同上调基因条目见表4。
在GO富集分析的下调基因条目中，臣药组富集到30个条目，银翘散组仅富集到10个条目，具体基因条目见表5。其中仅nucleus条目与臣药组相同，臣药下调该条目中的51个基因（FOXD4L1、EID3、SSH3、CCNE1、CENPBD1、SYCP3、PER3、CDKN2C、HSPA1B、PHF13、HEXIM1、FIGNL2、TREX2、ZNF、ZBED1、UBC、H2AFX、CBX2、NFKBIE、RBM14、TUBB2A、HSPA5、TUBB4B、FEN1、FBXO43、FAM71F2、CABYR、EID2B、TEF、GADD45B、ATF5、BCL9L、CEMIP、MYLK2、ZCCHC5、PHF7、SERTAD3、FOXD2、FOXD4、TUBA1C、IMP3、TIGD1、TIGD3、TIGD4、TBR1、FOXJ1、DYRK3、ZFC3H1、UTP3、RARG、HIST1H2AG），银翘散仅下调该条目中的5个基因（FOXD4L1、EID3、SSH3、TRIM22、AKAP17A）。
3.4.3差异基因KEGG富集分析利用KEGG数据库对差异基因进行信号通路（pathway）分析，可以找到富集差异基因的pathway条目，寻找不同样本的差异基因可能与哪些通路的改变有关。在富集的差异最显著的前20（Top20）条信号通路中，银翘散组和臣药组有13条通路重合，见表6。相同信号通路所涉及到的上调基因，臣药组基本囊括了银翘散组的上调基因，且臣药组上调的基因数目比银翘散组多（图6）。臣药和银翘散组富集到的不同信号通路见表7。
在KEGG富集到的Top20下调信号通路中，银翘散组仅富集到17条信号通路；其中，仅necroptosis信号通路同时被银翘散和臣药调节，见表8。
4讨论
本研究显示，银翘散及其拆方治疗病*性肺炎药效强度为臣药＞银翘散＞使药＞君药＞佐药，药效强度并非与君、臣、佐、使的中药配伍理论完全一致。金银花和连翘为君药，疏散风热、清热解*、避秽化浊；臣药薄荷和牛蒡子疏散风热、清利头目、解*利咽，荆芥穗和淡豆豉发散解表；佐药淡竹叶、芦苇根清热生津，桔梗宣肺止咳；生甘草调和诸药，又合桔梗利咽止咳，为佐使之用[7]。从银翘散的方解可以看出，金银花和连翘的功效相当于现代药理学中抗病*、抗菌的作用，而解热作用略微。薄荷、牛蒡子、荆芥穗和淡豆豉构成的臣药组，其功效涵盖了现代药理学的解热、抗病*、抗菌的作用。淡竹叶、芦苇根和桔梗都有解热作用，桔梗还具有镇咳的作用[8]。现代药理学研究表明生甘草的作用较为广泛，包括免疫增强、抗病*、抗菌、抗炎、镇咳、祛痰等作用[9-10]。采用现代药理学方法对中药复方的配伍进行探究，能够明确各配伍组分对复方整体药效的贡献程度。
NK细胞在清除流感病*中发挥着关键作用。人类NK细胞表面存在2类受体：激活性受体（killeractivatingreceptor，KAR）和抑制性受体（killerinhibitingreceptor，KIR），它们分别介导NK细胞的激活和抑制。与人类NK细胞相似，小鼠NK细胞表面也存在这2类受体。研究证实[11]，小鼠感染流感病*后，Ly-49抑制性受体（Ly-49I和Ly-49Q）缺陷的小鼠比野生型小鼠存活时间更长；而当回补表达Ly-49I和Ly-49Q受体后，小鼠又恢复了对流感病*的敏感性。提示NK细胞参与流感病*的疾病过程，Ly-49受体直接参与了NK细胞清除流感病*的免疫应答效应。
Ly-49基因家族受体主要表达在小鼠NK细胞，是C型凝集素超家族成员之一。Ly-49D是Ly-49家族中第一个被证实传递激活性信号的蛋白分子[12-13]，属于KAR类受体，Ly-49D受体介导的生物学效应是促进NK细胞活化，进而促使NK细胞发挥杀伤效应。PR8流感病*感染显著下调Ly-49D受体介导的促炎细胞因子和趋化因子的产生[14]。
Ly-49Ｈ是Ly-49家族的另一个激活性受体，其激活效应由NK细胞表面的跨膜接头蛋白DAP12（DAP12的胞质域含有免疫受体酪氨酸激活基序）介导。Ly-49H的抗病*效应最早发现于小鼠巨细胞病*（murinecytomegalovirus，MCMV）。表达Ly-49H受体的转基因小鼠更不易感染MCMV[15]。当Ly-49H-DAP12受体复合物突变的小鼠感染MCMV时，脾脏病*滴度增加30～40倍，肝脏病*滴度增加2～5倍，且肝脏NK细胞产生γ干扰素（interferon-γ，IFN-γ）的比例降低了（56.00±0.22）%，说明Ly-49Ｈ的正常活化对抑制MCMV具有重要作用[16]。有研究还发现，Ly-49H受体表达呈阳性的NK细胞会在小鼠淋巴组织和非淋巴组织存在数月；在MCMV感染小鼠的恢复期，当再次感染MCMV时，Ly-49H受体表达呈阳性的NK细胞会被重新激活，并迅速发生脱颗粒、释放细胞因子[17]。这打破了人们对NK细胞在传统意义上的认识：NK细胞不仅参与抗病*反应的固有免疫应答，而且同样参与了获得性免疫应答。关于Ly-49H受体在流感病*中的作用，目前还未见相关文献报道。本研究中，PR8流感病*的感染使Ly-49H受体在肺脏的含量降低，经抗病*药物利巴韦林和银翘散及其拆方（臣药、使药、君药和佐药）治疗后，Ly-49H受体含量均升高；而且，这些药物对流感病*PR8感染引起的小鼠肺炎有抑制作用。上述药物对肺炎的抑制作用和对肺脏中Ly-49D、Ly-49H含量的促进作用基本一致，其作用强度均为臣药＞银翘散/使药＞君药＞佐药。说明上述药物对病*性肺炎的抑制作用越强，NK细胞激活性受体（L-49D和Ly-49H）在肺脏中的含量也越高。
NK细胞的细胞*效应是NK细胞杀伤靶细胞的重要途径，该效应主要由细胞*性受体介导。人类主要有3种细胞*性受体：NKp30、NKp44和NKp46。小鼠NK细胞的细胞*性反应由NKp46介导；小鼠的NKp46又称作NCR1（naturalcytotoxicityreceptor1）。NKp46识别流感病*血凝素[18]，使NK细胞能够识别病*感染的细胞，进而损伤靶细胞，防止流感病*感染宿主细胞[19]。有研究者采用绿色荧光蛋白（greenfluorescentproteins，GFP）报告基因标记的NKp46受体示踪NK细胞，发现在小鼠感染流感病*PR8后的5d内，肺脏、血液、脾脏和骨髓均观察到GFP，且肺脏中GFP数量最多，感染第5天的数量高于前4d；并证明NKp46对于体内流感病*的清除发挥了关键作用[20]。本研究中，小鼠肺脏中NKp46受体因感染PR8流感病*含量降低，银翘散和臣药均能增加NKp46受体的含量，这可能是银翘散和臣药抑制小鼠感染PR8病*引起肺炎的作用途径之一。
本研究分别从药效学（肺质量抑制率）和作用机制（NK细胞激活性受体和细胞*性受体）2方面证实：银翘散中臣药（薄荷、牛蒡子、淡豆豉、荆芥穗）的药效与银翘散全方相似，且略优于银翘散。这为银翘散的精简提供了现代药理学依据，臣药可以作为一个独立的复方用于流感病*引起的感冒的治疗。为了进一步探究臣药优于银翘散的原因，本实验建立了人流感病*HK8感染人NK细胞株NK-92MI的细胞模型，分别以银翘散和臣药进行干预，分析药物对NK细胞转录组的影响。
银翘散显著上调的基因在臣药组也同样显著上调；且很多基因在臣药治疗后上调，而银翘散不能显著上调这些基因（图5）。如对细胞表面成分的影响，银翘散上调6个基因（VCAM1、SLC3A2、HRG、AREG、KCNE2、SLC7A11），而臣药同时还上调VEGFA、HBEGF、TIGIT3个基因。T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸基抑制基序结构域（T-cellimmunoglobulinandimmunoreceptortyrosine-basedinhibitorymotifdomain，TIGIT）是一种新型的抑制性受体，在T细胞和NK细胞上均有表达。TIGIT编码的蛋白有助于辅助性T细胞和树突状细胞之间的相互作用，以调节T细胞依赖的B细胞的反应。TIGIT虽被定义为抑制性受体，但研究表明，NK细胞上TIGIT受体表达阳性的野生型小鼠对各种刺激的反应增强，而TIGIT受体缺陷会损害NK细胞的“missing-self”识别功能。TIGIT-CD信号通路能够使NK细胞更好地作为效应细胞参与到免疫应答反应中，而这一通路是不依赖于主要组织相容性复合体I（majorhisto
